伊利诺伊大学厄巴纳-香槟分校生物工程学教授、格兰杰工程学院院长拉希德·巴希尔(Rashid Bashir)领导的研究团队开发了一种新技术,能够在低浓度下快速、高灵敏度地检测多重耐药细菌和其他病原体。这项研究发表在《美国国家科学院院刊》(PNAS)上。

研究人员设计了一种基于CRISPR的检测方法,能够在血液中快速检测低水平的病原体遗传物质,无需核酸扩增。在基于CRISPR/Cas诊断测试中,引导RNA会结合病原体的DNA或RNA,激活Cas酶并切割报告核酸,切割后的核酸会发出荧光。然而,单一的CRISPR技术无法在没有预扩增步骤的情况下检测低水平的病原体。

巴希尔团队通过创建一个名为CRISPR-Cascade的复合体,将两个CRISPR/Cas单元结合起来,从而跳过了扩增步骤。其中一个单元包含特定病原体核酸的引导RNA和Cas蛋白。当Cas切割添加到系统中的特殊设计核酸时,核酸的一部分会释放出来并激活第二个CRISPR/Cas,触发正反馈循环,从而产生高信噪比。

该检测方法表现出前所未有的灵敏度,并且能够在没有预扩增的情况下检测到浓度远低于单一Cas检测限的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)DNA。该检测方法还为样本中四种常见血液病原体的存在提供了简单的“是/否”结果。

研究人员表示,这些结果可用于开发高灵敏度的基于CRISPR的诊断测试,能够在几分钟内检测病原体,无需核酸扩增。


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