研究人员运用了多种技术方法来开展此项研究。在动物实验方面，使用了基因敲入（KI）和基因敲除（KO）小鼠模型，如 Dmpk-CTGexp KI 小鼠和 Mbnl2 KO 小鼠 。在分子检测技术上，RNA 测序（RNA-seq）用于分析基因的剪接情况，确定 ASD 风险基因的异常剪接；交联免疫沉淀测序（CLIP-seq）则用于探究蛋白与 RNA 的相互作用。此外，还通过行为学实验，如三箱实验、自由二元社交互动实验等，来评估小鼠的社交行为。研究样本包括人类 DM1 患者的大脑组织、小鼠的大脑组织以及细胞系样本等。
研究结果主要围绕以下几个方面展开：
- DM1 前额叶皮层中 ASD 风险基因的错配剪接：分析人类 DM1 大脑 Brodmann 区域 10（BA10）的 RNA-seq 数据发现，DMPK-CTGexp突变会导致 ASD 风险基因的 RNA 错配剪接。约 1% 的可变剪接（AS）事件符合错配剪接标准，且 CTGexp重复长度与错配剪接事件显著正相关，同时在多个 ASD 风险基因集里发现错配剪接事件显著富集。
- Mbnl 条件性双敲除（cDKO）皮层模拟 DM1 中 ASD 风险基因的错配剪接：对 Mbnl cDKO 小鼠额叶皮层的 RNA-seq 数据分析显示，其错配剪接基因中 61% 的基因集显著富集，包括 ASD 风险基因集，且与人类 DM1 皮层中错配剪接的 ASD 风险基因存在显著重叠，表明 MBNL 缺失会扰乱 ASD 风险基因的剪接。
- DM1 和 Mbnl cDKO 中 ASD 风险基因的微外显子错配剪接：在 Mbnl cDKO 和 DM1 皮层中均发现神经元微外显子（miE）错配剪接显著富集，这些错配剪接的 miE 存在于多个高置信度的 ASD 风险基因中，且可能调节蛋白质结构。
- ASD 风险基因在皮层发育中的剪接调控：分析五个哺乳动物大脑不同发育阶段的基因表达数据，发现 MBNL 表达在新生儿到童年中期大脑发育过程中呈进化保守性增加，且与 ASD 风险基因的错配剪接水平密切相关。此外，产前 MBNL 缺失会影响 ASD 风险基因的剪接，如在 Mbnl cDKO 胚胎皮质神经元中检测到显著的 ASD 风险基因错配剪接。
- Mbnl2 KO 导致海马体中 ASD 风险基因的错配剪接：Mbnl2 在成年人类和小鼠的大脑多个区域高表达，对 Mbnl2 KO 小鼠海马体的研究发现，4% 的 AS 事件受到干扰，包括 Scn2a、Ank2 等多个 ASD 风险基因，且 ASD 风险基因列表在错配剪接基因中显著富集。
- MBNLs 直接调节 ASD 相关微外显子的剪接：对小鼠脑源性儿茶酚胺能（CAD）神经元细胞系进行 RNA-seq 分析，发现 Mbnl1;Mbnl2 双敲低（DKD）后，ASD 风险基因集显著富集错配剪接事件，且 MBNL 直接调节 Ank2 miE 的剪接。
- ASD 和 DM1 中 ANK2 微外显子的错配剪接：对比人类成年特发性 ASD 前额叶皮层和 DM1 患者的样本，发现二者存在共同错配剪接的基因和 AS 事件，如 ANK2 miE。MBNL 和 SRRM 蛋白对包括 Ank2 miE 在内的部分 miE 的剪接具有协同或补偿作用。
- 行为表型研究：通过对 Dmpk-CTGexp KI 和 Mbnl2 KO 小鼠的行为学测试发现，二者均出现社交互动缺陷和对新奇事物反应改变的现象，表明 DMPK-CTGexp表达或 MBNL2 蛋白缺失会导致这些行为变化。
研究结论表明，DMPK-CUG 的表达及随后 MBNL 剪接因子的隔离，对 ASD 风险基因的发育剪接程序产生负面影响，导致小鼠出现社交互动缺陷和对新刺激的受限反应。这揭示了一种产生自闭症特质的新途径，为 ASD 的治疗开辟了新的方向。例如，一些针对 DM1 的治疗策略，如使用 tideglusib 等药物，可能通过纠正 ASD 风险基因的错配剪接来改善 ASD 症状。此外，研究还发现了 MBNL 和 SRRM 蛋白在调节 ASD 相关 miE 剪接中的重要作用，为进一步理解 ASD 的发病机制提供了理论依据 。这项研究成果不仅加深了人们对 ASD 和 DM1 分子机制的理解，更为未来开发针对 ASD 的治疗方法奠定了基础，具有重要的科学意义和临床应用价值。
