弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）作为非霍奇金淋巴瘤最常见的亚型，尽管R-CHOP方案改善了临床结局，但复发和耐药仍是重大挑战。近年来，兼具先天与适应性免疫特性的γδ T细胞因其抗肿瘤潜力备受关注，但其在DLBCL中的异质性特征及临床关联仍不明确。尤其令人困惑的是，这类细胞既能通过分泌干扰素γ（IFN-γ）和颗粒酶B（GZMB）杀伤肿瘤，又可能因表达免疫检查点分子（如TIGIT）而功能耗竭。这种矛盾现象背后的分子机制及其对预后的影响，成为亟待解决的科学问题。
为解决这一难题，暨南大学医学院血液学研究所联合广东省人民医院的研究团队，对6例DLBCL患者和3例健康人外周血样本进行单细胞RNA测序（scRNA-seq），结合29例临床队列的流式验证，系统解析了γδ T细胞的异质性图谱。研究发现不仅揭示了DLBCL免疫微环境的新特征，更为重要的是，首次提出TIGIT+
γδ T细胞亚群可作为预后不良的独立标志物，相关成果发表于《Biomarker Research》。
关键技术方法
研究采用scRNA-seq对DLBCL患者和健康人外周血γδ T细胞进行转录组分析，通过磁珠分选（MACS）富集目标细胞，利用Seurat和Monocle软件进行聚类与拟时序分析。临床验证队列包含29例DLBCL患者和30例健康人，通过流式细胞术检测TIGIT表达，并采用Kaplan-Meier分析评估预后相关性。关键基因表达通过qPCR验证。
主要研究结果
1. γδ T细胞亚群的鉴定与功能特征
通过scRNA-seq将γδ T细胞分为6个功能亚群：
- C10-yδ-TCF7：高表达TCF7和LEF1，代表初始态细胞
- C11-yδ-GZMK：记忆表型，特征基因为GZMK和IL7R
- C12-yδ-TNF：抗肿瘤效应亚群，富集IFNG和TNF
- C13-yδ-GNLY：细胞毒性亚群，高表达NKG7和GZMB
- C14-yδ-TIGIT.1/2：耗竭亚群，TIGIThi
且呈现CXCR4hi
（TIGIT.1）或CX3CR1hi
（TIGIT.2）
拟时序分析显示，γδ T细胞从初始态（TCF7+
）经记忆态（GZMK+
）向终末耗竭态（TIGIT.2）分化，伴随干细胞因子TCF-1的丢失。
2. 耗竭与细胞毒性的矛盾共存
GSVA分析发现，TIGIT.2亚群同时具有高细胞毒性评分（PRF1+
GZMB+
）和高耗竭评分（TIGIT+
LAG3+
），而TIGIT.1则保留部分干细胞特性（TCF7+
CXCR4+
）。这种"耗竭-效应"双重表型可能解释DLBCL中免疫逃逸的机制。
3. 临床预后验证
流式检测证实DLBCL患者外周血TIGIT+
γδ T细胞比例显著升高（P=0.0004），且高表达组患者无进展生存期（PFS）更短（P=0.037）。CX3CR1hi
TIGIT.2亚群在复发/难治性患者中占比更高，提示其与疾病进展相关。
结论与意义
该研究首次在单细胞层面绘制了DLBCLγδ T细胞异质性图谱，提出TIGIT.1（TCF7+
CXCR4+
）和TIGIT.2（TCF7-
CX3CR1+
）分别对应前体耗竭（Tpex）和终末耗竭（Ttex）状态的新范式。临床数据证实TIGIT+
亚群可作为不良预后的生物标志物，为DLBCL的免疫检查点阻断治疗（如抗TIGIT疗法）提供理论依据。此外，CXCR4/CX3CR1的差异表达为调控γδ T细胞分化提供了潜在干预靶点，对优化过继性细胞治疗策略具有重要指导价值。
